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萬(wàn)柏隔水式細(xì)胞復(fù)蘇儀的原理過(guò)程分析

點(diǎn)擊次數(shù):1148 更新時(shí)間:2024-06-28
  萬(wàn)柏隔水式細(xì)胞復(fù)蘇儀是通過(guò)快速融化的手段保證細(xì)胞外結(jié)冰晶在很短時(shí)間內(nèi)融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞重新結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損害,復(fù)蘇成功的細(xì)胞可以保持很高的活力。
 
  當(dāng)溫度進(jìn)一步下降,細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰,產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑,則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因?yàn)槔鋬霰Wo(hù)劑容易同溶液中的水分子結(jié)合,從而降低冰點(diǎn),減少冰晶的形成,并且通過(guò)其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷,細(xì)胞得以在超低溫條件下保存。
 
  在復(fù)蘇時(shí),一般以很快的速度升溫,1-2 分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫,細(xì)胞內(nèi)外不會(huì)重新形成較大的冰晶,也不會(huì)暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間,從而無(wú)冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生,凍存的細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。
 
  冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護(hù)劑其冷凍保護(hù)效果也不一樣。
 
  冷凍保護(hù)體外培養(yǎng)物,除了必須有最佳的冷凍速率、合適的冷凍保護(hù)劑和凍存溫度外,在復(fù)蘇時(shí)也必須有最佳的復(fù)溫速率,這樣才能保證最后獲得最佳冷凍保存效果。復(fù)溫速率是指在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)溫度升高的速度。復(fù)溫速率不當(dāng)也會(huì)降低凍存細(xì)胞存活率。一般來(lái)說(shuō),復(fù)溫速度越快越好。常規(guī)的做法是,在 370C 水浴中,于1-2分鐘內(nèi)完成復(fù)蘇。復(fù)溫速度過(guò)慢,細(xì)胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細(xì)胞損傷。復(fù)溫時(shí)造成的細(xì)胞損傷非???,往往在極短的時(shí)間內(nèi)發(fā)生。
 
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